FXYD5基因真核表达载体的构建及其功能的初步研究

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FXYD5基因真核表达载体的构建及其功能的初步研究

王本极,潘嘉林,黄晓燕,施翔翔,程碧环,金胜威,杨德业

325000,温州医科大学附属第二医院ICU%温州医科大学附属第一医院心内科%杭州师范大学附属医院心内科

Construction of eukaryotic expression vector of rat FXYD5 gene and preliminary study of its function

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摘要目的构建大鼠离子通道相关蛋白（FXYD5）基因真核表达载体,研究其对大鼠胸主动脉平滑肌细胞（CRL-1444）的体外作用。方法以含FXYD5全长cDNA的pBluescript II KS（+/-）载体为模板，并用PCR方法扩增,将其连接于真核表达质粒pcDNA3.1（+），PCR、双酶切和测序鉴定后，用脂质体包裹转染大鼠胸主动脉细胞，转染重组真核表达载体为实验组（PF组），转染空质粒PCDNA3.1（+）为阴性对照组（NC组）和未做处理的为空白对照组（BC组）。Real- time PCR定量检测各组FXYD5的表达水平，并研究该基因对CRL-1444细胞膜钠钾泵（Na+- K+- ATPase）活性、细胞增殖能力、迁移力的影响。结果重组的真核表达载体pcDNA3.1（+）- FXYD5构建成功, PF组FXYD5的表达水平较BC组上调17.312倍（P＜0.05）， PF组的细胞膜Na+- K+- ATPase活性高于BC组和NC组（均P＜0.05），细胞增殖能力和迁移力均高于NC组（均P＜0.05）。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3.1（+）- FXYD5，并在CRL-1444细胞中使FXYD5基因的表达水平增加，且增强CRL-1444细胞膜的Na+- K+- ATPase活性、细胞增殖和迁移能力。

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通讯作者: 王本极

引用本文:

王本极,潘嘉林,黄晓燕,施翔翔,程碧环,金胜威,杨德业. FXYD5基因真核表达载体的构建及其功能的初步研究[J]. , 2014, 33(1): 27-31.

链接本文:

http://www.xdyxh.com/CN/ 或 http://www.xdyxh.com/CN/Y2014/V33/I1/27