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| 热休克蛋白90对hERG-A561V通道蛋白转运及通道功能影响的研究 |
| 王英 叶佳纯 黄晓燕 陈邦盛 廉姜芳 |
| 宁波市医疗中心李惠利医院心内科 |
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摘要 目的探讨热休克蛋白90（Hsp90）对人类ether-a-go-go相关基因（hERG）-A561V通道蛋白转运及通道功能影响的研究。方法构建野生型（WT）、突变型（A561V）、杂合型（WT/A561V）细胞模型，采用蛋白质印迹法检测各组细胞hERG及Hsp90蛋白表达差异。转染减表达空载（ItfNC）、Hsp90减表达（Hsp90-）、过表达空载（OvpNC）或Hsp90过表达（Hsp90+）质粒至各细胞模型（即ItfNC组、Hsp90-组、OvpNC组、Hsp90+组），另设不加载体的对照（Ctl）组，采用蛋白质印迹法检测各组细胞调控Hsp90前后hERG及Hsp90蛋白表达差异。采用免疫荧光法检测Hsp90调控前后杂合型细胞模型hERG及Hsp90蛋白定位表达情况。采用全细胞膜片钳技术检测调控Hsp90前后杂合型细胞模型hERG通道激活电流及尾电流密度。结果突变型、杂合型细胞模型Hsp90及hERG（135kDa）蛋白表达水平均较野生型明显升高（均P＜0.05）。野生型细胞模型Hsp90+组hERG（135kDa）、hERG（155kDa）蛋白表达水平较Ctl组、OvpNC组均明显升高（均P＜0.05），突变型细胞模型Hsp90+组hERG（135kDa）蛋白表达水平较Ctl组、OvpNC组均明显升高（均P＜0.05），杂合型细胞模型Hsp90+组hERG（155kDa）蛋白表达水平较Ctl组、OvpNC组均明显升高（均P＜0.05）。融合Hsp90和hERG蛋白后，Ctl组hERG表达于细胞膜、细胞质，Hsp90-组细胞膜上hERG蛋白表达减少，Hsp90+组细胞膜上hERG蛋白表达增多。与Ctl组比较，Hsp90+组Ikr曲线左移14.709，斜率因子k值未见明显变化。杂合型细胞模型Ctl组、Hsp90-组、Hsp90+组激活电流及尾电流密度均在50mV处达到最高；杂合型细胞模型Hsp90+组在20、30mV处的激活电流密度均明显高于Ctl组、Hsp90-组（均P＜0.05），在30、40mV处的尾电流密度均明显高于Ctl组、Hsp90-组（均P＜0.05）。结论Hsp90在hERG-A561V通道蛋白折叠转运中起作用，而上调Hsp90可促进WT/A561VhERG的折叠转运，进而影响通道功能。
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| 基金资助:宁波市科技计划项目（2019A610343、2022J039）；浙江省医药卫生科技计划项目（2023KY240） |
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