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| miR-494在阿霉素诱导大鼠心肌细胞损伤中的作用及机制研究 |
| 沈盛晖 叶建华 吴相忠 冯频频 彭鹏 |
| 浙江省立同德医院（浙江省中医药研究院）心血管科 |
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摘要 目的探讨miR-494在阿霉素（DOX）诱导大鼠心肌细胞损伤中的作用及机制。方法将大鼠H9C2细胞分为4组：对照组、DOX组、DOX+阴性对照（NC）模拟物组、DOX+miR-494模拟物组；除对照组，其余3组均采用5滋mol/LDOX与细胞共孵育法构建心肌细胞损伤模型；后两组分别进行NC模拟物、miR-494模拟物转染。采用细胞计数试剂盒8法检测细胞活力，实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-494、磷酸酶和张力蛋白同系物（PTEN）mRNA表达水平，原位末端转移酶标记染色法检测细胞凋亡率，蛋白质印迹法检测B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2关联X蛋白（Bax）、PTEN、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）蛋白表达水平，酶联免疫吸附试验检测乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）含量；采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-494与PTEN的相互作用。结果与对照组比较，DOX组H9C2细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平以及LDH、CK-MB含量均明显升高（均P＜0.01），而细胞活力、Bcl-2蛋白表达水平均明显降低（均P＜0.01）；与DOX+NC模拟物组比较，DOX+miR-494模拟物组H9C2细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平以及LDH、CK-MB含量均明显降低（均P＜0.01），而细胞活力、Bcl-2蛋白表达水平均明显升高（均P＜0.01）。PTEN与miR-494存在结合位点；PTEN-WT的荧光素酶活性被miR-494模拟物明显抑制（P=0.010），而PTEN-MUT的荧光素酶活性不受miR-494模拟物影响（P=0.707）。与对照组比较，DOX组H9C2细胞中p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平均明显降低（均P＜0.01）；与DOX+NC模拟物组比较，DOX+miR-494模拟物组H9C2细胞中p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平均明显升高（均P＜0.01）。结论miR-494可能通过靶向抑制PTEN表达来调控PI3K/Akt信号通路，以改善DOX诱导的心肌细胞损伤。
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| 基金资助:浙江省基础公益研究计划项目（LGF22H020018）；浙江省医药卫生科技计划项目（2022KY701） |
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